Plasmide CRISPR/Cas9 KO NHE-6 (h): sc-404829

Présentation

SLC9A6 code pour l’échangeur endosomal Na+/H+ NHE-6, un régulateur clé du pH des organites et de l’homéostasie ionique, qui soutient la maturation des endosomes, le recyclage des récepteurs et le trafic vésiculaire. En modulant les gradients de protons luminal, NHE-6 influence des processus tels que la signalisation des facteurs de croissance, le tri des protéines membranaires et les voies de dégradation liées aux lysosomes. Dans les neurones, l’activité de SLC9A6 est étroitement liée au développement synaptique et au transport intracellulaire, et son dysfonctionnement a été associé à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une déficience intellectuelle syndromique liée à l’X. Ces caractéristiques font de NHE-6 un nœud pertinent pour étudier la biologie endosomale, la dynamique de la signalisation et les mécanismes génotype–phénotype dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NHE-6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC9A6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC9A6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC9A6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NHE-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC9A6 pour l'étude de la signalisation de NHE-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC9A6 essentiels à la fonction de NHE-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC9A6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NHE-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NHE-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC9A6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NHE-6 plasmide HDR (h) et le NHE-6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC9A6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC9A6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.