LMX1B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402945

Descripción general

LMX1B codifica un factor de transcripción LIM homeobox que regula la especificación del destino celular y el patrón tisular durante el desarrollo, con funciones destacadas en la identidad dorsal de las extremidades, la diferenciación de podocitos y los programas de subtipos neuronales. Controla la expresión génica al coordinar interacciones mediadas por dominios LIM con co-reguladores transcripcionales y la unión al ADN mediada por el homeodominio, influyendo en la morfogénesis, la organización de la matriz extracelular y la arquitectura del citoesqueleto. En biología renal, LMX1B contribuye a la integridad de la barrera de filtración glomerular modulando redes génicas de podocitos, lo que lo vincula a vías que gobiernan la estructura del diafragma de hendidura y la dinámica de actina. La alteración genética de LMX1B se asocia con el síndrome uña-rótula y fenotipos renales y esqueléticos relacionados, lo que lo convierte en un objetivo relevante para estudiar la regulación transcripcional en el desarrollo y la organogénesis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO LMX1B (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen LMX1B en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del LMX1B junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de LMX1B tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína LMX1B.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en LMX1B para la investigación de la señalización de LMX1B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de LMX1B críticos para la función de LMX1B
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de LMX1B para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido LMX1B CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido LMX1B CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus LMX1B. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR LMX1B (h) y el plásmido HDR LMX1B (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología LMX1B para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana LMX1B definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.