LMP7 Double Nickaseプラスミド (m): sc-421450-NIC

Psmb8 は、免疫プロテアソームの触媒サブユニットである LMP7（β5i）をコードしている。LMP7 は、インターフェロンシグナルなどの炎症性刺激に応答して恒常型プロテアソームの構成要素と置き換わる特殊なプロテアーゼである。LMP7 はユビキチン–プロテアソーム系による分解を調節するとともに、MHC クラス I による抗原提示のために産生されるペプチドのレパートリーを形成し、獲得免疫による監視に影響を及ぼす。マウス免疫細胞では、免疫プロテアソーム活性が酸化ストレスや炎症ストレス下でのプロテオスタシスに寄与し、NF-κB に関連する炎症プログラムにも影響する。PSMB8/LMP7 機能の変化は、抗原プロセシングの破綻や炎症性表現型と関連づけられており、免疫調節および免疫病態の機構研究における重要性が示唆される。

LMP7 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Psmb8 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Psmb8内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Psmb8の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Psmb8が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。