Plasmide CRISPR d'Activation (h) HLA-E: sc-403124-ACT

HLA-E code une molécule non classique du CMH de classe I qui présente un répertoire peptidique restreint, incluant des peptides leaders provenant d’autres protéines HLA de classe I, afin de réguler la surveillance immunitaire. À la surface cellulaire, HLA-E interagit principalement avec des récepteurs inhibiteurs et activateurs tels que CD94/NKG2A et CD94/NKG2C sur les cellules NK et certaines sous-populations de lymphocytes T, s’inscrivant dans la présentation antigénique et une signalisation de type « point de contrôle » immunitaire qui ajuste les réponses cytotoxiques. En modulant les seuils d’activation des cellules NK et T, HLA-E influence les réponses à l’infection, à l’inflammation et aux interactions tumeur–système immunitaire, et une expression altérée a été associée à des phénotypes d’échappement immunitaire dans de multiples contextes pathologiques. Sa régulation recoupe des voies dépendantes des cytokines, notamment la signalisation des interférons, qui modulent les programmes de traitement et de présentation des antigènes.

HLA-E Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HLA-E sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HLA-E Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HLA-E dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HLA-E, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HLA-E. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HLA-E natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HLA-E au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HLA-E dans les cellules tumorales présentant une expression de HLA-E silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.