HIGD2A Plasmide Double Nickase (h): sc-406650-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HIGD2A Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il HIGD2A Double Nickase Plasmid (h) e il HIGD2A Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira HIGD2A. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HIGD2A Antibody (A-6): sc-390505
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HIGD2A Plasmide Double Nickase (h) | sc-406650-NIC | 20 µg | $410.00 |
HIGD2A (membro 2A della famiglia dei domini inducibili dall’ipossia) codifica una piccola proteina della membrana mitocondriale interna che supporta la fosforilazione ossidativa promuovendo l’assemblaggio e la stabilità della citocromo c ossidasi (Complesso IV), in particolare tramite la regolazione della biogenesi del modulo COX3. Influenzando l’integrità della catena di trasporto degli elettroni, HIGD2A contribuisce alla respirazione mitocondriale, al mantenimento del potenziale di membrana e alle risposte cellulari allo stress metabolico e all’ipossia. Un’alterazione della funzione di HIGD2A dovrebbe avere effetti sull’omeostasi bioenergetica, sulla gestione delle specie reattive dell’ossigeno e sulle vie di controllo qualità mitocondriale. Questi processi sono spesso studiati nel contesto della disfunzione mitocondriale e del rimodellamento metabolico osservati in un’ampia gamma di fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.
HIGD2A Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus HIGD2A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di HIGD2A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di HIGD2A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con HIGD2A interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.