Plásmido Doble Nickase (h) HIGD2A: sc-406650-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HIGD2A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HIGD2A (h) y el plásmido de doble nickasa HIGD2A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HIGD2A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HIGD2A Anticuerpo (A-6): sc-390505
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HIGD2A | sc-406650-NIC | 20 µg | $410.00 |
HIGD2A (miembro 2A de la familia de dominios inducibles por hipoxia) codifica una pequeña proteína de la membrana mitocondrial interna que favorece la fosforilación oxidativa al promover el ensamblaje y la estabilidad de la citocromo c oxidasa (Complejo IV), en particular mediante la regulación de la biogénesis del módulo COX3. Al influir en la integridad de la cadena de transporte de electrones, HIGD2A contribuye a la respiración mitocondrial, al mantenimiento del potencial de membrana y a las respuestas celulares al estrés metabólico y por falta de oxígeno. Se espera que la alteración de la función de HIGD2A afecte la homeostasis bioenergética, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las vías de control de calidad mitocondrial. Estos procesos se estudian con frecuencia en el contexto de la disfunción mitocondrial y la remodelación metabólica observadas en una variedad de fenotipos celulares relevantes para enfermedades.
HIGD2A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HIGD2A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HIGD2A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HIGD2A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HIGD2A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.