Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLDC: sc-403511-ACT

Le gène humain **GLDC** code la glycine décarboxylase, la protéine P du système mitochondrial de clivage de la glycine, qui catalyse la décarboxylation de la glycine et favorise le transfert d’unités monocarbonées vers le tétrahydrofolate. Par cette activité, GLDC relie le catabolisme des acides aminés au métabolisme monocarboné dépendant des folates, influençant la biosynthèse des nucléotides, l’équilibre rédox et les flux de carbone mitochondriaux. Une perturbation de la fonction de GLDC dérègle l’homéostasie de la glycine et les voies monocarbonées ; GLDC est impliqué dans des erreurs innées du métabolisme de la glycine ainsi que dans des contextes plus larges de dysrégulation métabolique. En tant qu’enzyme mitochondriale centrale pour l’utilisation de la glycine, GLDC est fréquemment étudié pour son rôle dans l’adaptation métabolique cellulaire et la régulation de la capacité biosynthétique.

GLDC Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLDC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLDC Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLDC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLDC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLDC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLDC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLDC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLDC dans les cellules tumorales présentant une expression de GLDC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.