GDF-15 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-423881-ACT

成長分化因子15（Gdf15）は、細胞傷害、炎症、ミトコンドリア機能不全、代謝の不均衡によって誘導される、TGF-βスーパーファミリーに属するストレス応答性サイトカインであるGDF-15をコードします。マウス組織においてGDF-15は、統合ストレス応答、免疫調節、エネルギー恒常性に関連する転写プログラムを調節し、マクロファージ活性化や全身性の代謝適応などの過程に影響を与えます。Gdf15の発現変化は、心代謝表現型、炎症状態、ならびにがん関連の生物学と関連付けられており、組織のストレスやリモデリングを反映し得ます。これらの特性により、GDF-15はサイトカインシグナル伝達、ストレス適応経路、免疫系と代謝系のコンパートメント間のクロストークを解析するための有用な要所（ノード）となります。

GDF-15 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Gdf15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

GDF-15 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Gdf15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGdf15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GDF-15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGdf15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGDF-15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGdf15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGDF-15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。