FOXL2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403351-ACT

FOXL2 codifica um fator de transcrição da família forkhead que desempenha um papel central no desenvolvimento ovariano e na identidade das células da granulosa, ao regular programas de expressão gênica específicos de linhagem. Ele modula redes transcricionais que controlam a esteroidogênese, a foliculogênese e o equilíbrio do ciclo celular por meio de interações com a sinalização de receptores nucleares e reguladores associados à cromatina. A atividade de FOXL2 contribui para a manutenção da função ovariana e dos estados de diferenciação celular, e a desregulação do controle transcricional dependente de FOXL2 tem sido associada a distúrbios endócrinos reprodutivos e a assinaturas de expressão gênica relacionadas a tumores. Como regulador que se liga ao DNA, FOXL2 é frequentemente estudado por seus efeitos na ocupação de promotores/realçadores (enhancers), no estado epigenético e na saída transcricional dependente do contexto.

FOXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOXL2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

FOXL2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOXL2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOXL2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de FOXL2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOXL2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de FOXL2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via FOXL2 em células tumorais com expressão de FOXL2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.