Plasmide CRISPR d'Activation (h) Estrogen Receptor beta: sc-400213-ACT

ESR2 code le récepteur des œstrogènes bêta (ERβ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui régule des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération cellulaire, la différenciation, le métabolisme et la signalisation inflammatoire. Lors de la liaison aux œstrogènes ou à des modulateurs sélectifs, ERβ interagit avec les éléments de réponse aux œstrogènes et des complexes de corégulateurs afin de coordonner des interactions avec les voies MAPK/ERK, PI3K/AKT et NF-κB. L’activité d’ERβ contribue à une homéostasie spécifique des tissus dans les systèmes reproducteur, cardiovasculaire, immunitaire et nerveux, où des altérations d’expression ou de signalisation ont été associées à la biologie des tumeurs hormono-dépendantes et à des phénotypes liés au système endocrinien. Dans les cellules humaines, le statut d’ESR2 est fréquemment évalué comme déterminant de l’équilibre de la signalisation œstrogénique par rapport à ESR1, orientant les études des réseaux transcriptionnels et de la régulation de la chromatine.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ESR2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Estrogen Receptor beta Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ESR2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ESR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Estrogen Receptor beta. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ESR2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Estrogen Receptor beta au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Estrogen Receptor beta dans les cellules tumorales présentant une expression de ESR2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.