Plasmide CRISPR d'Activation (h) CYP17A1: sc-401918-ACT

CYP17A1 code le cytochrome P450 17A1, une monooxygénase microsomale qui catalyse à la fois les réactions de 17α-hydroxylase et de 17,20-lyase dans les tissus stéroïdogènes, orientant le flux au sein de la biosynthèse des glucocorticoïdes et des stéroïdes sexuels. En tant que nœud clé de la voie des hormones stéroïdes, CYP17A1 influence la production en aval d’androgènes et d’œstrogènes et contribue à la régulation endocrinienne grâce à une activité coordonnée avec d’autres enzymes P450 et des partenaires rédox dans le réticulum endoplasmique. Une expression ou une fonction enzymatique altérée de CYP17A1 a été associée à des déséquilibres de la stéroïdogenèse et à des phénotypes endocriniens, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du métabolisme hormonal et des programmes de transcription dépendants des signaux. La modulation expérimentale de CYP17A1 soutient l’étude des états cellulaires induits par les stéroïdes, du reprogrammation métabolique et des interactions entre voies (crosstalk) pertinentes pour la biologie endocrinienne.

CYP17A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CYP17A1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CYP17A1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CYP17A1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CYP17A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CYP17A1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CYP17A1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CYP17A1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CYP17A1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CYP17A1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.