Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPOX (h): sc-405130
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- CPOX Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique CPOX, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CPOX Antibody (B-9): sc-393388
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO CPOX (h) | sc-405130 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
La coproporphyrinogène oxydase (CPOX) est une enzyme mitochondriale qui catalyse la décarboxylation oxydative du coproporphyrinogène III en protoporphyrinogène IX, une étape tardive clé de la voie de biosynthèse de l’hème. En contrôlant le flux au sein du métabolisme des porphyrines, CPOX soutient des processus dépendants de l’hème, notamment la respiration mitochondriale, la fonction des cytochromes et l’homéostasie rédox cellulaire. Une altération de l’activité de CPOX est liée à l’accumulation d’intermédiaires porphyriniques et a été associée à la coproporphyrie héréditaire ainsi qu’à des phénotypes métaboliques apparentés. CPOX constitue donc un nœud mécanistiquement informatif pour étudier le métabolisme mitochondrial, les réponses au stress oxydant et la régulation de la voie hème/porphyrines dans les cellules humaines.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CPOX (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CPOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CPOX, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CPOX à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CPOX.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CPOX pour l'étude de la signalisation de CPOX, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de CPOX essentiels à la fonction de CPOX
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CPOX pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le CPOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CPOX plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CPOX. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le CPOX plasmide HDR (h) et le CPOX (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CPOX pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CPOX définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.