Cdk3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400846-ACT

CDK3 codifica la chinasi ciclina-dipendente 3 (Cdk3), una chinasi serina/treonina che contribuisce al controllo del ciclo cellulare associandosi alle cicline per regolare le transizioni durante la fase G1 e l’ingresso nella fase S. Cdk3 è stata collegata a eventi di fosforilazione che modulano programmi trascrizionali, inclusa la regolazione dell’espressione genica responsiva al ciclo cellulare tramite vie come la segnalazione RB/E2F. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di CDK3 possono influire sulla proliferazione e sul controllo dei checkpoint, processi spesso perturbati nel cancro e in altri stati iperproliferativi. Di conseguenza, CDK3 è comunemente studiato nel contesto della dinamica del ciclo cellulare, delle reti di segnalazione oncogenica e della regolazione trascrizionale.

Cdk3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CDK3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Cdk3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CDK3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CDK3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Cdk3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CDK3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Cdk3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Cdk3 nelle cellule tumorali con espressione di CDK3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.