Plasmide CRISPR d'Activation (h) C3: sc-400622-ACT

Le composant 3 du complément humain (C3) constitue un nœud central de la cascade du complément. Il est produit sous forme de zymogène sécrété, puis clivé par protéolyse en C3a et C3b, ce qui amplifie les réponses de l’immunité innée. C3b opsonise les cibles de manière covalente afin de favoriser la phagocytose et la clairance des complexes immuns, tandis que C3a agit comme une anaphylatoxine modulant le recrutement des leucocytes et la signalisation inflammatoire. En intégrant les voies classique, des lectines et alternative, C3 régule la défense de l’hôte, l’élagage synaptique et le dialogue avec les réseaux de coagulation et de cytokines. Une activité ou un traitement de C3 dérégulés sont impliqués dans l’inflammation médiée par le complément et les lésions tissulaires, avec des implications pour les maladies auto-immunes, la biologie des infections ainsi que les affections neuro-inflammatoires et dégénératives.

C3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de C3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

C3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus C3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription C3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de C3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus C3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de C3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie C3 dans les cellules tumorales présentant une expression de C3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.