Particules Lentivirales d'Activation (h) BAT2: sc-409707-LAC

PRRC2A code pour la protéine humaine BAT2, un grand facteur de liaison à l’ARN riche en proline, impliqué dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique ainsi que dans le contrôle de la stabilité et de la traduction des ARNm. BAT2 a été associée à la biologie des granules d’ARN induits par le stress et, plus largement, à la régulation de programmes transcriptionnels liés à l’immunité, ce qui concorde avec sa proximité génomique avec la région du CMH de classe III. Des variations ou une expression altérée de PRRC2A/BAT2 ont été rapportées dans des études portant sur des phénotypes inflammatoires et auto-immuns, ainsi que dans des signatures d’expression liées au cancer, ce qui étaye sa pertinence pour des voies gouvernant l’activation immunitaire, les transitions d’état cellulaire et la prolifération. Ces caractéristiques font de PRRC2A un nœud utile pour étudier comment les protéines régulatrices de l’ARN ajustent les sorties de signalisation dans des contextes cellulaires pertinents pour les maladies.

Les particules d'activation lentivirales BAT2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRRC2A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales BAT2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRRC2A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de BAT2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRRC2A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.