Plasmide CRISPR d'Activation (h) Arginase 2/ARG2: sc-400639-ACT

Le gène humain ARG2 code l’arginase 2, une métalloenzyme mitochondriale qui hydrolyse la L-arginine en L-ornithine et en urée, modulant la biodisponibilité cellulaire de l’arginine et, en aval, la biosynthèse des polyamines et de la proline. En entrant en compétition avec les synthases de l’oxyde nitrique pour la L-arginine, ARG2 influence la signalisation de l’oxyde nitrique, l’équilibre redox et la polarisation inflammatoire dans les compartiments immunitaires et stromaux. L’activité d’ARG2 s’articule avec la gestion de l’azote liée au cycle de l’urée, le métabolisme mitochondrial et les réseaux de transport des acides aminés qui régulent la prolifération et les réponses au stress. Une expression dérégulée d’ARG2 a été associée à des altérations de l’immunométabolisme, à des dysfonctionnements vasculaires et au remodelage du microenvironnement tumoral, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques des voies dépendantes de l’arginine.

Arginase 2/ARG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ARG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Arginase 2/ARG2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ARG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ARG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Arginase 2/ARG2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ARG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Arginase 2/ARG2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Arginase 2/ARG2 dans les cellules tumorales présentant une expression de ARG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.