Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (m): sc-418964

Présentation

Acta1 code ACTA1, l’isoforme d’α-actine sarcomérique prédominante dans le muscle squelettique, où elle polymérise en filaments fins qui s’ancrent aux disques Z et permettent la contraction basée sur l’actomyosine. ACTA1 fait le lien entre l’organisation structurale du cytosquelette et la signalisation contractile régulée par le calcium, soutenant la myofibrillogenèse, le maintien des sarcomères et la transmission des forces mécaniques. Une altération de la fonction d’ACTA1 perturbe l’intégrité et la contractilité des fibres musculaires et est associée à des myopathies congénitales, ce qui en fait un nœud central pour l’étude, in vivo et in vitro, des défauts d’assemblage des sarcomères et des mécanismes de dégénérescence musculaire. Dans les modèles murins, Acta1 sert de marqueur clé et de déterminant fonctionnel de la différenciation du muscle squelettique, du remodelage des types de fibres et des réponses au stress induit par la charge mécanique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACTA1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Acta1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Acta1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Acta1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACTA1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Acta1 pour l'étude de la signalisation de ACTA1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Acta1 essentiels à la fonction de ACTA1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Acta1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACTA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ACTA1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Acta1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACTA1 plasmide HDR (m) et le ACTA1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Acta1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Acta1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.