Particules Lentivirales d'Activation (h) ACAT-1: sc-402300-LAC

ACAT1 code l’acétyl‑CoA acétyltransférase 1 (ACAT‑1), une thiolase mitochondriale qui catalyse la condensation réversible de deux molécules d’acétyl‑CoA en acétoacétyl‑CoA et participe à l’utilisation des corps cétoniques ainsi qu’au catabolisme des acides aminés à chaîne ramifiée. Par son rôle dans le flux mitochondrial d’acétyl‑CoA, ACAT‑1 contribue à coordonner le métabolisme oxydatif, l’équilibre rédox et la sélection des substrats en situation de stress nutritionnel. La dérégulation des voies liées à ACAT1 a été associée à des erreurs innées du métabolisme des corps cétoniques et des acides aminés, ainsi qu’à des états métaboliques mitochondriaux altérés pertinents pour des phénotypes neurodéveloppementaux et neurométaboliques. La fonction d’ACAT‑1 est également fréquemment étudiée dans les travaux sur le remodelage métabolique des cellules cancéreuses et des cellules immunitaires, où l’orientation du carbone au sein de la mitochondrie influence les programmes de prolifération et de différenciation.

Les particules d'activation lentivirales ACAT-1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ACAT1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ACAT-1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ACAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ACAT-1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ACAT1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.