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WDR33双切口酶质粒(h) | sc-409284-NIC | 20 µg | $410.00 |
人类 WDR33 编码剪切与多聚腺苷酸化特异性因子(CPSF)复合体的核心组分之一,该复合体介导前体 mRNA 的 3′ 端加工。WDR33 参与识别经典的 AAUAAA 多聚腺苷酸化信号,并帮助协调内切酶切割与 poly(A) 尾添加,从而影响转录本稳定性、核输出和翻译。通过在可变多聚腺苷酸化中的作用,WDR33 会影响全局基因表达程序,并可影响细胞增殖、分化以及应激反应。包括 WDR33 在内的 3′ 端加工与多聚腺苷酸化通路组分的失调,与多种疾病模型中观察到的异常 mRNA 异构体使用和基因表达变化研究密切相关。
WDR33 双切酶质粒(h)由一对匹配的质粒组成,专为在 human 细胞系中对 WDR33 位点进行高特异性编辑而设计。每个质粒分别表达Cas9 D10A切口酶和针对WDR33内不同DNA链的独特sgRNA。当这两种切口酶被引导至相邻但位于DNA链相反侧的位点时,会产生错位的单链切口,从而共同形成错位双链断裂,这需要两个引导RNA在靶位点上协同发挥作用。由此产生的DNA断裂通过内源性细胞修复途径(最常见的是非同源末端连接(NHEJ))得到修复,从而导致插入或缺失,进而破坏WDR33的功能。通过要求双sgRNA在靶位点结合,双切口方法提高了编辑特异性,并为需要对靶向精度进行额外控制的应用提供了互补的CRISPR策略。
为高效识别编辑后的细胞,其中一个质粒编码GFP以实现转染细胞群的荧光可视化,而配套质粒则携带嘌呤霉素抗性基因用于抗生素筛选。这些特性共同支持共转染细胞群的高效富集,并简化了WDR33基因失活克隆的验证流程。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。