Villin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400587

Visão geral

VIL1 codifica a vilina (villin), uma proteína de ligação à actina específica de epitélio, enriquecida na borda em escova de células intestinais e de células do túbulo proximal renal, onde agrupa, “capa” e secciona F-actina para moldar a arquitetura das microvilosidades. Por meio de remodelação da actina regulada por Ca2+ e por fosfoinositídeos, a vilina sustenta a polaridade epitelial, o tráfego de membrana na superfície apical e a função de barreira durante a diferenciação e a regeneração. VIL1 é amplamente utilizado como marcador da linhagem de enterócitos e de maturação epitelial, e alterações na expressão ou na localização da vilina são relatadas em contextos de lesão gastrointestinal e inflamação, bem como na biologia de tumores epiteliais. Essas propriedades fazem de VIL1 um alvo prático para estudar a dinâmica do citoesqueleto, a morfogênese epitelial e a manutenção das microvilosidades.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Villin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VIL1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VIL1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VIL1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Villin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VIL1 para a investigação da sinalização de Villin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VIL1 críticos para a função Villin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VIL1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Villin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Villin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VIL1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Villin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Villin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VIL1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VIL1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.