utrophin CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400522-ACT

ヒトのUTRNは、ジストロフィン関連の細胞骨格タンパク質であるユートロフィンをコードしており、サルコレマ（筋細胞膜）および神経筋接合部などの特殊な膜ドメインにおいて、アクチンネットワークをジストロフィン–糖タンパク質複合体へ連結します。ユートロフィンは、細胞外マトリックス成分、膜貫通受容体、細胞内足場タンパク質間の相互作用を調整することで、膜の安定性、メカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）、および接着関連シグナル伝達の組織化に寄与します。その発現は発生段階に応じて制御され、しばしばシナプス領域に豊富に見られるため、筋線維構築やシナプス維持の研究を支えています。ユートロフィンの量や局在の変化は、筋ジストロフィーの生物学や筋の健全性に影響する代償経路の文脈で、しばしば検討されます。

utrophin CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性UTRNの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

utrophin CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における UTRN 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はUTRN転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性utrophinの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のUTRN遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるutrophin依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびUTRN発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるutrophin経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。