Plásmido CRISPR de Activación (h) TRPC5: sc-403745-ACT

TRPC5 codifica un canal catiónico no selectivo, permeable al Ca2+, de la familia de potencial receptor transitorio canónico (TRPC), que contribuye a la entrada de calcio operada por receptores en la membrana plasmática. TRPC5 integra señales aguas abajo de receptores acoplados a proteínas G y de receptores tirosina cinasa mediante vías dependientes de la fosfolipasa C, modulando la dinámica intracelular de Ca2+ que regula la excitabilidad de la membrana, la remodelación del citoesqueleto y las respuestas transcripcionales. La actividad del canal se ha relacionado con la señalización neuronal y sensorial, la fisiología vascular y renal, y la modulación de la migración celular. La desregulación de la señalización de TRPC5 se estudia con frecuencia en el contexto del dolor y de conductas relacionadas con la ansiedad, la lesión de podocitos y los mecanismos de enfermedad renal proteinúrica, así como la motilidad de células cancerosas y fenotipos de respuesta a fármacos.

TRPC5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de TRPC5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

TRPC5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus TRPC5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional TRPC5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de TRPC5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo TRPC5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de TRPC5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía TRPC5 en células tumorales con expresión de TRPC5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.