SETX CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402354-ACT

ヒトSETXはセナタキシンをコードしており、RNA:DNAハイブリッド（Rループ）を解消するスーパーファミリー1のDNA/RNAヘリカーゼである。セナタキシンは転写終結、複製―転写コンフリクトの解決、ならびにゲノム安定性の維持を支える。SETXはDNA損傷応答にも関与し、RNAプロセシングを転写関連損傷の修復と結び付けるとともに、高転写領域における異常な組換えを抑制する。SETX機能の破綻は、眼球運動失行を伴う運動失調2型や若年性筋萎縮性側索硬化症などの神経変性・神経筋表現型と関連しており、RNA代謝およびストレス応答経路における重要性を示している。

SETX CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SETXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

SETX CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SETX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSETX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性SETXの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSETX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSETX依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSETX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSETX経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。