MO25 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419399

Descripción general

Cab39 codifica la proteína andamiaje MO25, un socio de unión esencial del complejo de quinasas LKB1 (STK11) que estabiliza y potencia alostéricamente quinasas relacionadas con AMPK. A través de esta función, MO25 contribuye a la señalización de detección del estado energético, al establecimiento de la polaridad celular y al control del metabolismo en respuesta al estrés mediante vías vinculadas a AMPK y a quinasas afines como MARK y miembros de la familia SIK. En células de ratón, la alteración de Cab39 puede modificar redes de fosforilación que influyen en la organización del citoesqueleto, la polaridad epitelial y programas de control del crecimiento coordinados por la señalización dependiente de LKB1. Dado que la desregulación del eje LKB1–AMPK está ampliamente implicada en el desequilibrio metabólico y la biología tumoral, Cab39 se estudia con frecuencia como un nodo modulador que afecta a estos procesos en sistemas modelo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MO25 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cab39 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cab39 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cab39 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MO25.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cab39 para la investigación de la señalización de MO25, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cab39 críticos para la función de MO25
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cab39 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MO25 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido MO25 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cab39. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MO25 (m) y el plásmido HDR MO25 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cab39 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cab39 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.