Plásmido Doble Nickase (m) LAL: sc-421438-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)LAL consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LAL (m) y el plásmido de doble nickasa LAL (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Lipa. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LAL Anticuerpo (9G7F12): sc-58374
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) LAL | sc-421438-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) LAL | sc-421438-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen **Lipa** de ratón codifica la **lipasa ácida lisosomal (LAL)**, una hidrolasa que escinde ésteres de colesterol y triglicéridos dentro de los lisosomas para generar colesterol libre y ácidos grasos. Esta actividad sustenta el recambio intracelular de lípidos, el tráfico de colesterol y la homeostasis metabólica, e influye en la función lisosomal y en programas de señalización sensibles a los lípidos. El catabolismo lipídico dependiente de LAL se integra con vías que regulan el manejo de lipoproteínas, la dinámica autófago-lisosoma y las respuestas inflamatorias a la acumulación de lípidos. La alteración de la función de Lipa/LAL se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos de almacenamiento lipídico lisosomal y de mecanismos posteriores de estrés metabólico relevantes para la biología hepática y de células inmunitarias.
LAL El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Lipa en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Lipa. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Lipa. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Lipa alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.