Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α1/ITGA1/CD49a: sc-401275-ACT

ITGA1 codifica la integrina α1 (CD49a), una subunidad α que se asocia con la integrina β1 para formar el receptor α1β1 de colágeno/laminina y mediar la adhesión célula–matriz extracelular. Este receptor regula la señalización de las adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y vías posteriores como FAK/Src, MAPK/ERK y PI3K-AKT, que influyen en la migración, la supervivencia y la diferenciación. La actividad de ITGA1 contribuye a la detección de la MEC, la mecanotransducción y la remodelación tisular en contextos estromales e inmunitarios, incluidos microambientes ricos en colágeno. La desregulación de la señalización de la integrina α1 se ha asociado con remodelación fibrótica, tráfico de células inflamatorias e invasión de células tumorales en múltiples modelos relevantes para enfermedades en los que se alteran la composición de la MEC y la señalización de adhesión.

Integrin α1/ITGA1/CD49a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α1/ITGA1/CD49a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α1/ITGA1/CD49a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α1/ITGA1/CD49a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α1/ITGA1/CD49a en células tumorales con expresión de ITGA1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.