HIF1a CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400036-ACT

HIF1Aは、低酸素誘導因子1α（HIF1a）をコードしており、酸素濃度に感受性をもつ転写因子として、低酸素状態への細胞の適応を統括します。安定化すると、HIF1aはARNT（HIF-1β）と二量体を形成し、低酸素応答エレメントに結合して、解糖系、血管新生シグナル、赤血球産生、pH恒常性、ならびに細胞生存を制御する遺伝子の発現を調節します。この酸素感知プログラムは、PI3K–AKT–mTORシグナル伝達、ミトコンドリア代謝、レドックス経路とも相互に連関し、炎症・免疫細胞の状態や間質のリモデリングにも影響を与えます。HIF1A活性の異常な制御は、虚血性障害に対する応答、慢性炎症、腫瘍微小環境の生物学と関連しており、低酸素駆動性フェノタイプの機構研究における中心的な結節点となっています。

HIF1a CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HIF1Aの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HIF1a CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HIF1A 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHIF1A転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HIF1aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHIF1A遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHIF1a依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHIF1A発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHIF1a経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。