Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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hamartin Double Nickase Plasmid (m): sc-425739-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das hamartin Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- hamartin Double-Nickase-Plasmid (m) und hamartin Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Tsc1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: hamartin: sc-377386
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
hamartin Double Nickase Plasmid (m) | sc-425739-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
hamartin Double Nickase Plasmid (m2) | sc-425739-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen **Tsc1** kodiert **Hamartin**, ein Gerüstprotein (Scaffold-Protein), das mit **TSC2** (Tuberin) einen funktionellen Komplex bildet und als zentraler negativer Regulator der **mTORC1**-Signalgebung wirkt. Über seine GAP-Aktivität gegenüber **Rheb** in Partnerschaft mit TSC2 integriert der TSC1/TSC2-Komplex Signale aus **PI3K–AKT**, **AMPK** sowie zellulären Energie- und Stressreizen, um anabole Wachstumsprogramme, Translation und Autophagie zu dämpfen. Der Verlust der Hamartin-Funktion stört die homöostatische Kontrolle von Zellgröße und Stoffwechsel und ist eng mit der Biologie des **Tuberöse-Sklerose-Komplexes** verknüpft, einschließlich aberranter proliferativer und neuroentwicklungsbezogener Phänotypen in experimentellen Modellen. Entsprechend wird **Tsc1** häufig in Studien zur Nährstoffsensorik, Proteostase, synaptischen Funktion und zu Tumorsuppressor-Signalwegen eingesetzt.
hamartin Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Tsc1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Tsc1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Tsc1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Tsc1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.