Plásmido Doble Nickase (h) Gelsolin: sc-401005-NIC

GSN codifica la gelsolina, una proteína de unión a la actina regulada por Ca²⁺ que corta y tapa los filamentos de actina para remodelar el citoesqueleto y controlar la forma celular, la adhesión y la motilidad. Al regular la dinámica de la actina, la gelsolina influye en procesos como la endocitosis, el tráfico de membranas y la apoptosis, y se integra con redes de señalización que incluyen las vías de los fosfoinosítidos y de las GTPasas de la familia Rho, que coordinan el recambio del citoesqueleto. La actividad o expresión alterada de la gelsolina se ha relacionado con fenotipos de migración e invasión celular desregulados, y se estudia en contextos como la inflamación, la neurobiología y la remodelación cardiovascular. Variantes patogénicas en GSN también se asocian con trastornos amiloidogénicos por mal plegamiento proteico, lo que respalda su relevancia en la homeostasis proteica y en patologías relacionadas con la matriz extracelular.

Gelsolin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSN alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.