Gelsolin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432743

Panoramica

Il gene murino **Gsn** codifica la gelsolina, una proteina legante l’actina regolata dal Ca2+ che recide, cappuccia e nuclea i filamenti di actina per controllare il rimodellamento del citoscheletro. Modulando la dinamica dell’actina, la gelsolina contribuisce ai cambiamenti di forma cellulare, alla motilità, all’endocitosi e alla fagocitosi, e interagisce con reti di segnalazione quali la regolazione dei fosfoinositidi e le vie collegate alle GTPasi della famiglia Rho che accoppiano segnali di membrana alla riorganizzazione dell’actina. Alterazioni dell’attività e dell’espressione della gelsolina sono state associate a migrazione cellulare disregolata, risposte infiammatorie e rimodellamento tissutale, rendendola un nodo utile per lo studio di fenotipi guidati dal citoscheletro. Nei sistemi murini, la perturbazione di **Gsn** supporta ricerche meccanicistiche su processi dipendenti dall’actina rilevanti per la biologia vascolare, la neurobiologia e la funzione delle cellule immunitarie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Gsn in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Gsn insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Gsn a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Gelsolin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Gsn per lo studio della segnalazione di Gelsolin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Gsn critici per la funzione di Gelsolin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Gsn per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Gelsolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Gelsolin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Gsn. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Gelsolin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Gelsolin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Gsn per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Gsn definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.