Gelsolin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401005

Visão geral

GSN codifica a gelsolina, uma proteína ligante de actina regulada por cálcio que corta e “capeia” filamentos de actina para controlar a remodelação do citoesqueleto e a mecânica celular. Ao modular a dinâmica de polimerização da actina, a gelsolina contribui para processos como motilidade celular, adesão, endocitose e apoptose, além de se integrar a vias de sinalização que governam respostas ao estresse e o tráfego de membranas. Alterações na expressão de GSN ou na atividade da gelsolina têm sido associadas a mudanças na remodelação tecidual e em microambientes inflamatórios, sendo frequentemente estudadas no contexto de invasão de células cancerosas, neurodegeneração e biologia cardiovascular. Como reguladora-chave da renovação dos filamentos de actina, a gelsolina oferece um ponto acessível para dissecar fenótipos dependentes de actina em diversos modelos de células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Gelsolin (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GSN em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GSN, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GSN na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Gelsolin.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GSN para a investigação da sinalização de Gelsolin, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GSN críticos para a função Gelsolin
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GSN para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Gelsolin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Gelsolin Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GSN. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Gelsolin Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Gelsolin (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GSN para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GSN definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.