Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
FAAH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402470
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- FAAH El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico FAAH, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: FAAH Anticuerpo (27-Y): sc-100739
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
FAAH Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-402470 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
FAAH (hidrolasa de amidas de ácidos grasos) es una hidrolasa de serina asociada a membrana que termina la señalización al hidrolizar amidas de ácidos grasos bioactivos, incluido el endocannabinoide anandamida y N-aciletanolaminas relacionadas. Al controlar el recambio de mediadores lipídicos, FAAH modula el tono endocannabinoide, se interrelaciona con la señalización de los receptores CB1/CB2 e influye en vías posteriores dependientes de cAMP/PKA, MAPK y calcio. La actividad de FAAH también configura redes metabólicas lipídicas más amplias que regulan las respuestas celulares al estrés y la neurotransmisión. La expresión o función alteradas de FAAH se han asociado con una desregulación de las vías neuroinflamatorias y de procesamiento del dolor, y se estudian en el contexto de fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO FAAH (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FAAH en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FAAH junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FAAH tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína FAAH.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FAAH para la investigación de la señalización de FAAH, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de FAAH críticos para la función de FAAH
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FAAH para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido FAAH CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido FAAH CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FAAH. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR FAAH (h) y el plásmido HDR FAAH (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FAAH para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FAAH definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.