Plásmido CRISPR de Activación (h) FAAH: sc-402470-ACT

La FAAH humana (hidrolasa de amidas de ácidos grasos) es una hidrolasa de serina asociada a membrana que finaliza la señalización mediada por amidas de ácidos grasos bioactivas, entre ellas la anandamida y otras N-aciletanolaminas relacionadas. Al controlar el tono endocannabinoide, la FAAH regula la transmisión sináptica, la señalización neuroinflamatoria, la percepción del dolor y la homeostasis metabólica a través de vías de señalización lipídica. Las alteraciones en la actividad de la FAAH se han vinculado con una señalización desregulada de los receptores cannabinoides y se estudian en contextos que incluyen fenotipos neuropsiquiátricos, biología del consumo de sustancias, procesos inflamatorios y metabolismo asociado a la obesidad. Por ello, la FAAH constituye un nodo clave para investigar el recambio de mediadores lipídicos y las respuestas transcripcionales y celulares posteriores.

FAAH El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de FAAH sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

FAAH El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus FAAH en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional FAAH, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de FAAH. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo FAAH y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de FAAH en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía FAAH en células tumorales con expresión de FAAH silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.