Plásmido Doble Nickase (h) EXOSC10: sc-404272-NIC

EXOSC10 codifica una subunidad catalítica del exosoma de ARN, conservada evolutivamente, que funciona como una exorribonucleasa 3′–5′ y contribuye a la vigilancia y el procesamiento de ARN tanto en el compartimento nuclear como en el citoplasmático. Participa en la maduración y el recambio de rARN, snoARN, snARN y ARNm, y ayuda a mantener la integridad del transcriptoma al degradar ARN aberrantes o procesados de forma incorrecta. A través de estas funciones, EXOSC10 influye en la biogénesis de ribosomas, la homeostasis nucleolar y las vías de control de calidad del ARN, que se entrecruzan con la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés celular. La desregulación de componentes del exosoma de ARN, incluido EXOSC10, se ha relacionado con alteraciones del metabolismo del ARN observadas en múltiples contextos de enfermedad, lo que lo convierte en una diana relevante para estudios mecanísticos de defectos en el procesamiento de ARN.

EXOSC10 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus EXOSC10 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de EXOSC10. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de EXOSC10. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con EXOSC10 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.