dCK Plasmide Double Nickase (h): sc-417715-NIC

La deossicitidina chinasi (DCK) codifica dCK, una chinasi nucleosidica citosolica che catalizza la fosforilazione della deossicitidina e di deossinucleosidi purinici e pirimidinici correlati, sostenendo il recupero (salvage) dei deossinucleotidi e l’omeostasi dei dNTP. Convogliando i substrati nel metabolismo dei nucleotidi, dCK contribuisce a mantenere la replicazione e la riparazione del DNA e influenza le risposte cellulari allo stress replicativo. L’attività di DCK è strettamente legata al rimodellamento metabolico associato alla proliferazione e all’equilibrio mitocondrio–nucleo dei nucleotidi. Un’espressione o una funzione deregolata di DCK è stata associata ad alterazioni dei pool nucleotidici ed è stata studiata nelle neoplasie ematologiche, nell’immunobiologia e nell’adattamento metabolico dei tumori, dove la dipendenza dalla via di recupero può modellare la stabilità genomica e le transizioni dello stato cellulare.

dCK Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DCK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DCK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DCK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DCK interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.