COL6A3 Plasmide Double Nickase (h): sc-402899-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- COL6A3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il COL6A3 Double Nickase Plasmid (h) e il COL6A3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira COL6A3. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: COL6A3 Antibody (A-5): sc-515335
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
COL6A3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402899-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
COL6A3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402899-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **COL6A3** codifica la catena α3 del collagene di tipo VI, un componente chiave della matrice extracellulare che si assembla in reti microfibrillari a supporto della resistenza alla trazione dei tessuti e della meccanotrasduzione. **COL6A3** contribuisce all’adesione cellula–matrice, all’organizzazione della matrice e al dialogo con le vie di segnalazione legate a integrine e TGF-β, che influenzano l’attivazione dei fibroblasti, la miogenesi e il rimodellamento stromale. Un’espressione alterata di **COL6A3** o una deposizione anomala nella matrice è associata a fenotipi del tessuto connettivo e neuromuscolari, ed è spesso studiato nella biologia della fibrosi e del microambiente tumorale, dove la composizione della matrice extracellulare modella migrazione e differenziamento cellulari. In quanto gene della matrice fortemente dipendente dal contesto, **COL6A3** viene comunemente analizzato in sistemi di coltura 3D, organoidi e co-colture per chiarire i cambiamenti del comportamento cellulare guidati dalla matrice extracellulare.
COL6A3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus COL6A3 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di COL6A3. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di COL6A3. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con COL6A3 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.