Plásmido CRISPR de Activación (m) BMAL1: sc-419206-ACT

Arntl codifica BMAL1, un factor de transcripción PAS básico hélice–bucle–hélice central que forma heterodímeros con CLOCK para impulsar programas de expresión génica circadiana en tejidos de ratón. BMAL1 regula la transcripción rítmica de genes controlados por el reloj implicados en el metabolismo, el control del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN y la señalización inmunitaria, integrando señales ambientales con la fisiología celular. Mediante la modulación de bucles de retroalimentación transcripcional que involucran a las proteínas PER y CRY, BMAL1 influye en la función mitocondrial, el manejo del estrés oxidativo y la homeostasis endocrina. La actividad desregulada de BMAL1 se ha asociado con ritmos circadianos alterados y fenotipos relacionados en modelos de disfunción metabólica, inflamación y biología tumoral, lo que respalda su utilidad en investigación mecanística.

BMAL1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Arntl sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BMAL1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Arntl en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Arntl, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BMAL1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Arntl y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BMAL1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BMAL1 en células tumorales con expresión de Arntl silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.