Plásmido Doble Nickase (h) BCKDE1A: sc-417950-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BCKDE1A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BCKDE1A (h) y el plásmido de doble nickasa BCKDE1A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BCKDHA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BCKDE1A Anticuerpo (H-5): sc-271538
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BCKDE1A | sc-417950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BCKDE1A | sc-417950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCKDHA codifica la subunidad E1α del complejo deshidrogenasa de α-cetoácidos de cadena ramificada (BCKDH), un sistema enzimático mitocondrial que cataliza la descarboxilación oxidativa de los α-cetoácidos derivados de aminoácidos de cadena ramificada. Esta actividad es central para el catabolismo de la valina, la leucina y la isoleucina, y conecta el recambio de aminoácidos con la producción de acetil-CoA y succinil-CoA, influyendo en el equilibrio redox mitocondrial y el metabolismo energético. La función de BCKDHA se regula mediante la dinámica de fosforilación del complejo BCKDH y la disponibilidad de cofactores mitocondriales, integrando la detección de nutrientes con el flujo metabólico. La alteración de BCKDHA se asocia con un metabolismo deficiente de los aminoácidos de cadena ramificada y con errores innatos del metabolismo como la enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce, lo que la hace relevante para estudios de estrés metabólico, disfunción mitocondrial y señalización impulsada por aminoácidos.
BCKDE1A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BCKDHA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BCKDHA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BCKDHA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BCKDHA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.