ACTA2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400003

Descripción general

ACTA2 codifica la actina alfa del músculo liso (α‑SMA), un componente central del aparato contráctil en las células del músculo liso vascular y en los miofibroblastos activados. ACTA2 se integra en las fibras de estrés de actina para regular la contractilidad celular, la organización del citoesqueleto y la mecanotransducción, influyendo en procesos como la migración, la adhesión y la remodelación de la matriz extracelular. A través de la dinámica de la actina y de la señalización contráctil dependiente de RhoA/ROCK, ACTA2 contribuye al tono vascular y a las respuestas de rigidez tisular. La expresión o función desregulada de ACTA2 se asocia con la patobiología vascular y la remodelación fibroproliferativa, lo que respalda su relevancia en estudios sobre diferenciación del músculo liso y fenotipos asociados a la fibrosis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ACTA2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen ACTA2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del ACTA2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de ACTA2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ACTA2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en ACTA2 para la investigación de la señalización de ACTA2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de ACTA2 críticos para la función de ACTA2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de ACTA2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ACTA2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ACTA2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus ACTA2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ACTA2 (h) y el plásmido HDR ACTA2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología ACTA2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana ACTA2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.