ACTA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-418964

概要

Acta1はACTA1をコードしており、ACTA1は骨格筋におけるサルコメアαアクチンの主要アイソフォームです。ACTA1は重合してZディスクに固定される薄いフィラメント（thin filament）を形成し、アクトミオシンに基づく収縮を可能にします。ACTA1は、構造的な細胞骨格の組織化とカルシウム調節性の収縮シグナル伝達を統合し、筋原線維形成、サルコメアの維持、ならびに機械的な力の伝達を支えます。ACTA1機能の変化は筋線維の完全性と収縮性を損ない、先天性ミオパチーと関連することから、in vivoおよびin vitroにおけるサルコメア組み立て異常と筋変性メカニズムの研究における中心的な分子となっています。マウス系では、Acta1は骨格筋分化、線維タイプのリモデリング、ならびに機械的負荷に対するストレス応答の主要なマーカーであり機能決定因子として働きます。

ACTA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるActa1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Acta1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Acta1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、ACTA1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、ACTA1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Acta1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• ACTA1の機能に不可欠なActa1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Acta1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• ACTA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびACTA1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Acta1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  ACTA1 HDRプラスミド（m）および ACTA1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはActa1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のActa1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。