α_1A-AR Plasmide Double Nickase (m): sc-419021-NIC

Adra1a codifica il recettore adrenergico α1A del topo (α1A-AR), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che si accoppia principalmente a Gq/11 per stimolare la segnalazione della fosfolipasi C, la produzione di fosfati dell’inositolo, la mobilizzazione del Ca2+ intracellulare e l’attivazione della PKC. Attraverso queste vie, α1A-AR regola il tono della muscolatura liscia, la reattività vascolare e la neurotrasmissione simpatica, e può anche attivare a valle la segnalazione MAPK/ERK influenzando la proliferazione cellulare e le risposte allo stress. Nel sistema nervoso e negli organi periferici, l’attività di Adra1a integra i segnali catecolaminergici con la funzione dei canali ionici e con l’apparato contrattile. Un’alterazione della segnalazione adrenergica che coinvolge α1A-AR è stata implicata in fenotipi cardiovascolari e autonomici, oltre che in ruoli dipendenti dal contesto nella neurofisiologia, rendendo Adra1a un bersaglio utile per analizzare le reti di segnalazione guidate dai GPCR.

α1A-AR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Adra1a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Adra1a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Adra1a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Adra1a interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.