VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-433270

Übersicht

Vps33b kodiert VPS33B, ein Protein der Sec1/Munc18-Familie, das als zentrale Komponente der Andock- und Fusionsmaschinerie bei der Regulation des endosomalen–lysosomalen Traffickings fungiert. VPS33B arbeitet mit dem VPS16/18/33/41-Netzwerk (HOPS/CORVET-verwandt) sowie dem VPS33B–VIPAR-Komplex zusammen, um das Andocken von Vesikeln, die Membranfusion und die Aufrechterhaltung der epithelialen Polarität zu unterstützen. In Mauszellen trägt die VPS33B-Aktivität zur Sortierung von Fracht, zur Biogenese lysosomenassoziierter Organellen und zur regulierten Sekretion bei und ist damit in übergeordnete Signalwege eingebunden, die die Membranhomöostase und den intrazellulären Transport steuern. Störungen des VPS33B-abhängigen Traffickings wurden mit Defekten im polarisierten Transport und in der Bildung von Thrombozytengranula in Verbindung gebracht und liefern damit einen mechanistischen Rahmen zur Untersuchung von Pathologien mit epithelialer und hämatopoetischer Dysfunktion.

Das VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vps33b-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vps33b-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vps33b nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPS33B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vps33b-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPS33B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vps33b-Exone abzielen, die für die VPS33B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vps33b-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vps33b-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPS33B HDR-Plasmid (m) und VPS33B HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vps33b-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vps33b-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.