VPS33B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406200

Übersicht

VPS33B kodiert eine zentrale Komponente der Tethering-Maschinerie der Klasse C/VPS, die das Andocken von Vesikeln sowie die SNARE-abhängige Fusion im Endolysosomensystem koordiniert. Es wirkt zusammen mit VPS16 und verwandten Partnern, um die Endosomenreifung, die Lysosomenbiogenese und den polarisierten Membrantransport zu regulieren, und beeinflusst damit Proteinsortierung, Recycling und degradativen Durchsatz. Eine Störung von VPS33B beeinträchtigt die epitheliale Polarität und die Organisation des sekretorischen Transportwegs und wurde mit Multisystem-Erkrankungen des Vesikeltransports, darunter dem ARC-Syndrom, in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Membrandynamik und Organelle-Homöostase relevant macht. In Immun- und Barrieregeweben kann eine veränderte VPS33B-Aktivität die Handhabung von Granula/Vesikeln und die Zusammensetzung von Membranproteinen beeinflussen und schlägt damit eine Brücke zu übergeordneten Fragestellungen rund um Entzündung und Gewebeintegrität.

Das VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VPS33B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VPS33B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VPS33B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VPS33B-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VPS33B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VPS33B-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VPS33B-Exone abzielen, die für die VPS33B-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VPS33B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VPS33B CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VPS33B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VPS33B HDR-Plasmid (h) und VPS33B HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VPS33B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VPS33B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.