von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-423690

Übersicht

Vwf kodiert den von-Willebrand-Faktor (VWF), ein großes multimeres Glykoprotein, das von Endothelzellen und Megakaryozyten synthetisiert und in Weibel-Palade-Körperchen sowie in den α-Granula der Thrombozyten gespeichert wird. VWF vermittelt unter hohen Scherkräften die Adhäsion und Aggregation von Thrombozyten, indem er freiliegendes subendotheliales Kollagen mit dem Thrombozyten-Glykoprotein-Ib/IX/V überbrückt, und er stabilisiert den Gerinnungsfaktor VIII im Kreislauf. Seine regulierte Sekretion und die Verarbeitung der Multimere integrieren die Endothelaktivierung, Interaktionen mit der extrazellulären Matrix und hämostatische Proteasenetzwerke, die die primäre Hämostase koordinieren. Eine Dysregulation von VWF-Menge, Multimerverteilung oder Clearance stört das thromboinflammatorische Gleichgewicht und ist mit Blutungs- und Thrombose-Phänotypen verbunden, die für Modelle von Gefäßverletzung, Entzündung und Endotheldysfunktion relevant sind.

Das von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Vwf-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Vwf-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Vwf nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die von Willebrand Factor/VWF-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Vwf-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der von Willebrand Factor/VWF-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Vwf-Exone abzielen, die für die von Willebrand Factor/VWF-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Vwf-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom von Willebrand Factor/VWF CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Vwf-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das von Willebrand Factor/VWF HDR-Plasmid (m) und von Willebrand Factor/VWF HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Vwf-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Vwf-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.