VILIP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401100

Panoramica

VSNL1 codifica la proteina 1 simile alla visinina (VILIP-1), un sensore neuronale del calcio della famiglia EF-hand che va incontro a cambiamenti conformazionali dipendenti dal Ca2+ e all’associazione con la membrana mediata da uno “switch” miristoilico. VILIP-1 collega i transitori di calcio intracellulari alla regolazione della trasduzione del segnale, influenzando vie collegate a cAMP/cGMP, la plasticità sinaptica, la crescita dei neuriti e l’espressione genica dipendente dall’attività. Nei tessuti umani è arricchita nel sistema nervoso ed è comunemente utilizzata come marcatore dello stato neuronale e della dinamica della segnalazione del calcio. Alterazioni dell’espressione di VSNL1/VILIP-1 e dell’omeostasi del calcio sono state associate alla biologia di malattie neurodegenerative e neuropsichiatriche, a supporto di studi meccanicistici sulla vulnerabilità neuronale e sulle risposte allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO VILIP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene VSNL1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del VSNL1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto VSNL1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina VILIP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di VSNL1 per lo studio della segnalazione di VILIP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni VSNL1 critici per la funzione di VILIP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di VSNL1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal VILIP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal VILIP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus VSNL1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal VILIP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR VILIP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia VSNL1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio VSNL1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.