Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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UROS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423627
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- UROS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico UROS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: UROS Antibody (A-8): sc-365877
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
UROS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-423627 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Uros codifica per la uroporfirinogeno III sintasi (UROS), un enzima citosolico della via biosintetica dell’eme che converte l’idrossimetilbilano in uroporfirinogeno III, il precursore fisiologico per la successiva produzione di porfirine ed eme. Questo passaggio è essenziale per mantenere la disponibilità cellulare di eme, necessaria per la respirazione mitocondriale, la funzione dei citocromi e l’omeostasi redox. L’alterazione dell’attività di UROS provoca l’accumulo di isomeri di porfirine non fisiologici e compromette la maturazione eritroide e le risposte allo stress ossidativo. Nei modelli murini, Uros è comunemente studiato per indagare il metabolismo delle porfirine, l’eritropoiesi e i meccanismi che collegano lo squilibrio della via dell’eme alla fotosensibilità tissutale e a fenotipi associati all’anemia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO UROS (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Uros in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Uros insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Uros a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina UROS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Uros per lo studio della segnalazione di UROS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Uros critici per la funzione di UROS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Uros per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal UROS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal UROS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Uros. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal UROS Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR UROS (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Uros per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Uros definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.