Ubiquitin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423574

Panoramica

Ubb codifica l’ubiquitina, un modificatore di 76 amminoacidi altamente conservato che viene legato covalentemente alle proteine bersaglio per regolarne stabilità, localizzazione e segnalazione. L’ubiquitinazione coordina la degradazione dipendente dal proteasoma, l’endocitosi e le risposte al danno al DNA, e si interfaccia con l’autofagia tramite adattatori che legano l’ubiquitina per controllare la proteostasi. Nelle cellule di topo, la segnalazione dipendente dall’ubiquitina contribuisce ampiamente alla progressione del ciclo cellulare, alle risposte allo stress e alla regolazione delle vie immunitarie attraverso la topologia delle catene di ubiquitina e la specificità delle ligasi E3. L’omeostasi dell’ubiquitina e il flusso del proteasoma alterati sono spesso utilizzati come readout meccanicistici negli studi su neurodegenerazione, infiammazione e adattamento allo stress rilevante per il cancro, rendendo Ubb un nodo chiave per l’analisi delle vie di segnalazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ubiquitin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ubb in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ubb insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ubb a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ubiquitin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ubb per lo studio della segnalazione di Ubiquitin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ubb critici per la funzione di Ubiquitin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ubb per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ubb. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ubiquitin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ubiquitin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ubb per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ubb definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.