TREM-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417344-ACT

TREM1 kodiert den „triggering receptor expressed on myeloid cells 1“ (TREM-1), einen Immunrezeptor, der stark auf Neutrophilen sowie Monozyten/Makrophagen exprimiert wird und inflammatorische Signalwege als Antwort auf mikrobielle Produkte und gefahrassoziierte Signale verstärkt. Nach Ligandenbindung und Kopplung an den Adapter TYROBP/DAP12 aktiviert TREM-1 SYK-abhängige Signalwege, die in NF-κB- und MAPK-Signalkaskaden zusammenlaufen, wodurch die Produktion von Zytokinen und Chemokinen gefördert und angeborene Immun-Effektorfunktionen geprägt werden. Diese Achse überschneidet sich mit der Toll-like-Rezeptor-Signalisierung und inflammasomassoziierten Prozessen und beeinflusst so die Aktivierung und Migration von Leukozyten sowie das entzündliche Gewebemilieu. Eine fehlregulierte TREM-1-Aktivität wurde mit einer überschießenden myeloiden Entzündungsreaktion in infektiösen und entzündlichen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was TREM-1 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Regulation angeborener Immunantworten macht.

TREM-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TREM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TREM-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TREM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TREM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TREM-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TREM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TREM-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TREM-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TREM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.