TCP-1 γ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403203

Übersicht

CCT3 kodiert die humane Chaperonin-enthaltende TCP-1-Untereinheit Gamma (TCP-1 γ), eine zentrale Komponente des zytosolischen TRiC/CCT-Komplexes, der das ATP-abhängige Falten eines breiten Spektrums von Client-Proteinen vermittelt. TRiC/CCT unterstützt die Proteostase, indem es die Reifung von Zytoskelettproteinen wie Aktin und Tubulin fördert und zudem die Faltung und Stabilität von Signal- und Zellzyklusregulatoren beeinflusst. Über diese Funktionen trägt TCP-1 γ zur Organisation des Zytoskeletts, zur Proteinkontrolle/-qualitätskontrolle und zur Proliferationsfähigkeit bei; Störungen der Chaperonin-Funktion werden mit proteotoxischem Stress und veränderter Wachstumssignalgebung in Verbindung gebracht. Eine dysregulierte Expression von CCT-Untereinheiten wurde in unterschiedlichen Krankheitskontexten beschrieben, was die Untersuchung in Signalwegen unterstützt, die für onkogene Transformation und neurodegenerationsassoziierte Proteinfehlfaltung relevant sind.

Das TCP-1 γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCT3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCT3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCT3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die TCP-1 γ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCT3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der TCP-1 γ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCT3-Exone abzielen, die für die TCP-1 γ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCT3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom TCP-1 γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom TCP-1 γ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCT3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das TCP-1 γ HDR-Plasmid (h) und TCP-1 γ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCT3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCT3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.