Plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1E1 (m): sc-423185

Présentation

Sult1e1 code la sulfotransférase des œstrogènes (SULT1E1), une enzyme cytosolique de conjugaison de phase II qui catalyse la sulfatation des œstrogènes afin de produire des sulfates stéroïdiens inactifs et plus hydrosolubles. En régulant l’équilibre entre œstrogènes actifs et œstrogènes conjugués, SULT1E1 influence la signalisation des récepteurs aux œstrogènes et le dialogue avec les voies hépatiques du métabolisme des xénobiotiques, notamment via des interactions avec l’homéostasie des stéroïdes, la gestion des acides biliaires et, plus largement, les réseaux de sulfotransférases. Une activité modifiée de SULT1E1 peut déplacer les programmes transcriptionnels dépendants des hormones et a été associée à des états métaboliques et inflammatoires dans le foie et le tissu adipeux, ainsi qu’à des phénotypes sensibles aux hormones en biologie de la reproduction. Dans les modèles murins, Sult1e1 est donc pertinent pour étudier la régulation endocrinienne, les différences liées au sexe dans le métabolisme et le contrôle spécifique aux tissus de la signalisation stéroïdienne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SULT1E1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Sult1e1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Sult1e1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Sult1e1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SULT1E1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Sult1e1 pour l'étude de la signalisation de SULT1E1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Sult1e1 essentiels à la fonction de SULT1E1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Sult1e1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SULT1E1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SULT1E1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Sult1e1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SULT1E1 plasmide HDR (m) et le SULT1E1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Sult1e1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Sult1e1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.