SPARC Lentiviral Activation Particles (m): sc-423101-LAC

Mouse Sparc kodiert SPARC (Secreted Protein Acidic and Rich in Cysteine), ein matrizelluläres Glykoprotein, das die Organisation der extrazellulären Matrix (EZM), die Kollagenablagerung und die Zell–Matrix-Adhäsion moduliert, ohne selbst eine primäre strukturelle Komponente zu sein. SPARC beeinflusst die Gewebeumgestaltung, indem es die Signalübertragung von Wachstumsfaktoren sowie integrinabhängige Signalwege reguliert, die Zellmigration, Proliferation und Differenzierung steuern, und es ist mit Angiogenese- und Wundheilungsprogrammen verknüpft. Eine veränderte SPARC-Expression wird mit Fibrose, entzündlichen Mikroumgebungen und Tumor–Stroma-Interaktionen in Verbindung gebracht, was SPARC zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung EZM-getriebener Phänotypen in Entwicklungs- und Krankheitsmodellen macht.

SPARC Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Sparc-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SPARC Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Sparc-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SPARC-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Sparc-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.