SPARC Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-423101-LAC

Mouse Sparc codifica SPARC (secreted protein acidic and rich in cysteine), una glicoproteina matricellulare che modula l’organizzazione della matrice extracellulare (ECM), la deposizione di collagene e l’adesione cellula–matrice senza fungere da componente strutturale primaria. SPARC influenza il rimodellamento tissutale regolando la segnalazione dei fattori di crescita e le vie dipendenti dalle integrine che modellano migrazione, proliferazione e differenziamento cellulari, ed è associata a programmi di angiogenesi e riparazione delle ferite. Un’espressione alterata di SPARC è correlata a fibrosi, microambienti infiammatori e interazioni tumore–stroma, rendendola un nodo utile per studiare fenotipi guidati dall’ECM in modelli di sviluppo e di malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale SPARC (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Sparc in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale SPARC (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Sparc, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di SPARC. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Sparc e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.